产品货号:
WE0276
中文名称:
BCA蛋白定量试剂盒
英文名称:
BCA Protein Assay Kit
产品规格:
500T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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BCA蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。本制品是基于BCA(Bicin-choninic Acid)法研制而成,实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu2+络合生成络合物,同时将Cu2+还原成Cu+。BCA试剂可敏感特异地与Cu+结合,形成稳定的有颜色的复合物。在562nm处有高的光吸收值,颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量。本试剂盒含有牛血清白蛋白(BSA)溶液作为蛋白质标准品溶液,测定范围为20~2000μg/mL。
组成 | 规格 | 保存 |
BCA-A | 2×50mL | 室温 |
BCA-B | 3mL | 室温 |
BSA Standard Solution(2mg/mL) | 2mL | 2~8℃ |
本试剂盒提供的组分可供500个微孔检测或50管检测。
- 本试剂盒可以采用分光光度计(试管检测法)或者酶标仪(微孔检测法)测定蛋白浓度。
- 建议每次测定蛋白样品时,绘制标准曲线,以获得准确数据。
- BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致(可用1×PBS或0.9%生理盐水稀释)。
- 如待测样品中含较多的干扰物质(具体见附表1),可采用Bradford蛋白定量试剂盒(货号:WE0275)或其他蛋白定量产品。
- 稀释BSA标准品:用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。
管号 稀释液用量(μl) BSA标准品用量(μl) BSA标准品最终浓度(μg/μl) A 0 100 2 B 200 200 1 C 200 200(从B管中取) 0.5 D 200 200(从C管中取) 0.25 E 200 200(从D管中取) 0.125 F 200 200(从E管中取) 0.0625 G 200 0 0(空白) - 配置BCA工作液:
- 计算BCA工作液总量:
BCA工作液总量=(BSA标准品样本个数+未知样本个数)×复孔数×每个样本BCA工作液体积
举例:BSA标准品样本个数为7个,未知样本个数2个,复孔数3个。
试管检测法:
BCA工作液总量=(7个BSA标准品样本+2个未知样本)×3个复孔×2mL/每个样本工作液体积=54mL
微孔检测法:
BCA工作液总量=(7个BSA标准品样本+2个未知样本)×3个复孔×200μL/每个样本工作液体积=5.4mL - 根据计算出的BCA工作液需要总量,将BCA-A和BCA-B按照50:1的体积比,配制BCA工作液,充分混匀。
注意:
① 由于加样可能存在误差,建议配制BCA工作液时,多配制1~2个孔。
② 新配制的BCA工作液室温密封条件下可稳定保存24小时。
- 计算BCA工作液总量:
- 定量检测
- 试管检测法(蛋白浓度检测范围:20~2000μg/mL)
- 按上表,将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各100μL分别加到作好标记的试管中。推荐每个测定的样本做2~3个平行反应。
- 向每个试管中各加入2mL BCA工作液,充分混匀,37℃水浴中孵育30分钟,将各管冷却至室温,须在3~5分钟内完成检测。
- 用分光光度计在562nm处,测定每个样品及BSA标准品的吸光值,同时做好记录。
- 绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。
- 按上表,将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各100μL分别加到作好标记的试管中。推荐每个测定的样本做2~3个平行反应。
- 微孔检测法(蛋白浓度检测范围:20~2000μg/mL)
- 按上表,将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各25μL分别加到作好标记的96孔板微孔中。推荐每个测定的样本做2~3个平行反应。
- 每孔加入200μL BCA工作液,充分混匀,盖上96孔板盖,37℃孵育30分钟,冷却至室温,须在3~5分钟内完成检测。
- 用酶标仪在540~590nm范围内,测定每个样品及BSA标准品的吸光值,同时做好记录。
- 绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。
注意:
① BCA法测定蛋白浓度时,吸光值会随着时间的延长不断加深。因此所有样品测定需在3~5分钟内完成,否则会影响蛋白定量的准确度。
② 建议以去除背景值后的吸光值读数绘制标准曲线。
③ 由于操作误差导致标准品读数严重偏离线性曲线的应舍去。
④ 未知样品浓度可以从标准曲线方程中计算得出,实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。
⑤ 如果得到的蛋白浓度不在检测范围内,请重新稀释样品后再次测定。
- 按上表,将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各25μL分别加到作好标记的96孔板微孔中。推荐每个测定的样本做2~3个平行反应。
- 试管检测法(蛋白浓度检测范围:20~2000μg/mL)
- BCA蛋白定量分析结果举例:
微孔板检测法结果蛋白浓度(μg/μL) 原始吸光值 去除背景值后的吸光值 分析图 0 0.086(背景值) 0.000 0.125 0.123 0.037 0.25 0.280 0.194 0.5 0.551 0.465 1 1.068 0.982 2 2.000 1.913
附表1.干扰物质表
种类 | 化合物 | 耐受浓度 | 种类 | 化合物 | 耐受浓度 | |
缓冲液 | 乙酸盐 | 0.2M | 去垢剂和变性剂 | Brij35 | 1% | |
甘氨酸 | 1M | CHAPS | 1% | |||
HEPES | 0.1M | 盐酸胍 | 4M | |||
MES | 50mM | NP-40 | 1% | |||
MOPS | 50mM | 辛葡糖 | 1% | |||
Na+-柠檬酸 | <1mM | SDS | 1% | |||
PIPES | 50mM | Triton X-100 | 1% | |||
磷酸钠 | 0.1M | 盐类 | 硫酸铵 | 干扰 | ||
乙酸钠 | 0.2M pH5.5 | NaCl | 1M | |||
TES | 50mM | 尿素 | 3M | |||
Tris | 0.1M | 螯合剂 | EDTA | 10mM | ||
极性化合物 | DMSO | 5% | 还原剂 | β-巯基乙醇 | 50μM | |
甘油 | 10% | DTT | 1mM | |||
糖类 | 葡萄糖 | 10mM | 其他 | 脂类 | 干扰 | |
蔗糖 | 1M | HCl/NaOH | 0.1M |
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